En naviguant sur notre site vous acceptez l'installation et l'utilisation des cookies sur votre ordinateur. En savoir +

Menu Logo INRA Logo RARe Logo ISO 9001:2008 certified Logo Agrocampus Ouest - Institut supérieur des sciences agronomiques, agroalimentaires, horticoles et du paysage  Logo AgroParisTech - Institut des sciences et industries du vivant et de l'environnement Logo Aix Marseille Université Logo Université d'Angers Université de Tours

CIRM Centre International de Ressources Microbiennes

Mise en culture de bactéries lyophilisées

La mise en culture de bactéries lyophilisées doit être faite par du personnel qualifié dans des locaux adaptés (laboratoire de microbiologie).

Matériel nécessaire :

  • Bec Bunsen ou hotte à flux laminaire
  • Crayon à pointe diamant
  • Pipette Pasteur
  • Oëse ou pipette Pasteur boutonnée

Milieux :

  • Milieu liquide en tube (EPN ou autre bouillon nutritif) de 5 ml
  • Milieu gélosé en boîte de Pétri (LPGA ou autre gélose nutritive)

Mise en culture des souches lyophilisées :

Le protocole en vidéo :

Prendre l'ampoule, faire 3 traits de crayon graveur à l'étranglement prévu à cet effet.
Désinfecter à l'alcool, sécher à la flamme.
Casser l'ampoule.

Remettre le lyophilisat en suspension en prélevant 300 µl de bouillon dans un tube.
Bien homogénéiser avec l'étiquette qui peut retenir le lyophilisat.

Déposer deux gouttes du lyophilisat sur une gélose nutritive et mettre le reste dans le tube de bouillon.
Conserver une goutte intacte et étaler la seconde en 3 secteurs afin d'obtenir des colonies isolées.

Mettre à l'étuve boîtes et tubes à la température optimale de croissance de la souche.

En cas d'absence de croissance sur le milieu gélosé, il est possible d'étaler une goutte du bouillon sur un nouveau milieu gélosé.

CIRM-CFBP_DessinOvertureAmpoule

Composition des milieux usuels :

Eau Peptonée Nitraturée (EPN) pH 7.2

Bacto peptone

10g

NaCl
Eau distillée

5g
1000ml

Milieu LPGA pH 7.2

L : extrait de levure (Mérieux)
P : Bacto peptone (Mérieux)

7g
7g

G : Glucose
A : Agar Agar

7g
15g

Eau distillée

1000ml